Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现显露来呼吸道神经性反应会到显现显露来1改型癌症药理学副作用的成效率在成年人时期就有很好的详细描述，多个呼吸道神经性反应会阴性的成年人中会有70%在肝脏转换后10年末患上癌症，而随访15年的成年人这一%-增加到84%。远比之下，占药理学1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的发作有助于还没给与应有的数据量化。

愈加多的人开始适用分段兄系统来定义1改型癌症的成效：形态在显现显露来多种呼吸道神经性反应会时转回第1阶段，显现显露来血糖异常时转回第2阶段，显现显露来副作用时转回第3阶段。一些多发呼吸道神经性反应会阴性的形态，在1期和2期，成效更慢，并其发展为发作的1改型癌症。我们以前详细描述了一两组在首次验到多种呼吸道神经性反应会取样后至少10年无癌症的极慢成效者，这两组副作用人数少，但特点比较明确。随后，我们发现呼吸道自身复合物免疫CD8+T线粒体反应会在成效较快的副作用中会大体上不普遍存在，但在同类型发作和长期普遍存在的癌症副作用中会很容易验到。这有可能确实，与成效副作用远比，这些副作用神经性反应会的缓冲大幅提高。

早期数据量化确实，尽管缓冲性T线粒体(Treg)量短时间，但癌症副作用普遍存在一些功能缺陷，其中会除此以外对IL-2的反应会意志力降低。此外，癌症副作用中会的波动CD4+T线粒体有可能对缓冲非常具抵抗性，表现为波动T线粒体的可抑制消散，自然消除的Treg和活体消除的诱导Treg，以及复合物境况的CD4+T线粒体中会IL-2反应会消散。本数据量化的目的是详细描述了CD4+缓冲性T线粒体(Treg)在这群人极较快成效者中会的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方式：BOX数据量化是一项以许多人为基础的斜向数据量化，在21岁以下确诊的副作用亲族中会验1改型癌症的凶险因素。我们以前详细描述了长期较快成效者的特点，他们依然多重呼吸道神经性反应会阴性超过10年，但没显现显露来癌症的药理学副作用，慢性或非同步进行性神经性。随后，10名继续依然无癌症并愿意提供大量肝脏取样的较快成效者纳入T和B线粒体功能量化。在目前的数据量化中会，8名慢成效者(SP两组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的呼吸道神经性反应会阴性。所有的参与者都依然稳定1改型癌症成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道神经性反应会对某些复合物的阴性反应会，然而，一名副作用已经依然稳定2期至少6年，但没显现显露来药理学副作用，一名副作用被诊断为癌症，该受试者72岁，在收集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中会对该NAD同步进行了单独审计。分离外周血单个核分裂线粒体(PBMCs)，运用于多常量流式线粒体精和T线粒体可抑制试验审计NAD中会Treg的基频、表改型和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、总括和重返)同步进行无监督聚类量化，审计Treg表改型。

结果：与身体健康NAD远比，来自慢成效体的无意识CD4+T线粒体的监督聚类标示显露，抑制的无意识CD4+ Treg基频增加，与阿托品诱导的TNFR相关细胞内(GITR)解读增加有关。一名HbA1c升高的副作用与成效较快者和匹配的印证两组远比，Treg曲谱有所各有不同。功能量化确实，与身体健康NAD远比，来自较快成效体的Treg细胞内的CD4+波动T线粒体可抑制明显损毁。表现为对波动CD4+T线粒体CD25和CD134解读的可抑制增加。

布1 深入的表改型量化标示显露，CD4+Treg亚改型在慢成效配置文件中会增加。由FlowSOM转换成的Treg过道，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -线粒体上。根据标示显露物解读核对显露10个元簇:无意识T线粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T线粒体;HLA-DR + GITR +无意识T线粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个各有不同Treg标示显露转换成的10个元簇的MST。每个链表都有一个一个大(100个一个大)，非常大的元一个大(10个元一个大)在链表两组周围上色。每个链表中会的饼布问到单个标示显露的解读级别。(b)每个元聚类的热布，以标示显露整体标示显露解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对于原兄量为每个metacluster木箱直通布(原兄量> 0.05%)已确定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T线粒体(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T线粒体(l)。绿色边框都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 适用CITRUS的预测模改型得显露结论，Treg基频的增加是成效较快的标志。分级门控(a - f)和甜菜量化(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T线粒体上的差异。(a)兄代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的都有性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及NADSP 606(绿色)中会CD25+ cd127的基频概要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的木箱直通布;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度制做，标示显露突显露的簇被识别为SP和HD配置文件两者之间的各有不同。(j)木箱直通布标示显露了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中会，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于原兄量(%-)。(k)插值标示显露每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示显露相对于解读与取材解读(粉红色);上列，存储器Treg_3;下面偷偷地，存储器Treg_4。取材与所有其他簇中会标示显露的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩验

布3 与身体健康献血者远比，成效较快者无意识treg的GITR增加。每个无意识CD4+T线粒体元簇(无意识T线粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T线粒体;HLA-DR + GITR +无意识T线粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验每个解读标示显露的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热布(sp606不除此以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读结合，标示显露插值(c)和概要布(d)。Wilcoxon配对标记秩和验，p< 0.07(绿色)所有NAD除此以外，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和匹配的HD不除此以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)结合，标示显露插值(e)和概要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩验

布4 来自较快成效的CD4+ treg线粒体控制波动CD4+T线粒体的意志力降低。SP两组用粉红色的直通和边框问到，HD两组用黄色的直通和边框问到，绿色的直通/边框问到NADsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示显露为CFSE, Treg按观察的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活化线粒体，培养出来3天后同步进行流式线粒体精验。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg培养出来(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制多于。适用阴性印证(抑制的响应线粒体下同treg)近似值可抑制多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 波动CD4+T线粒体对较快成效的T线粒体活化的可抑制非常敏感。SP两组用粉红色的直通和边框问到，HD两组用黄色的直通和边框问到，绿色的直通/边框问到NADsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示显露，treg按观察的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活化线粒体，培养出来3天后同步进行流式线粒体精(CD25反染)和线粒体因兄量化。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学出来中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显露的结论是，来自较快成效兄的活化无意识CD4+Treg在GITR解读中会给与了扩展和多样，强调了进一步数据量化Treg在1改型癌症风险形态中会的异质性的前提。

书名显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28